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邯郸论文组

清华大学倪建泉课题组在《PNAS》杂志宣布论文报道条件性转录激活零碎

清华大学医学院2019-11-08 12:08:27

4月17日,清华大学医学院倪建泉研讨组在《PNAS》杂志宣布了题为“Next generation CRISPR/Cas9 transcriptional activation in Drosophila using flySAM”的研讨论文,报道了一种在果蝇体内高效、特异的条件性基因转录激活技能。


加强基因表达是停止基因功用研讨最常用的妙技之一,传统方法次要经过表达由外源载体携带的目标基因编码序列,但是常常呈现假阳性后果,并且目标基因的克隆步调繁琐,不克不及同时表达多个基因。


为了条件性加强基因表达,课题组经过一系列探究,起首研发了一套基于CRISPR/dCas9的VPR转录激活零碎(PNAS, 2017),dCas9-VPR受Gal4调控,并在sgRNA的引导下靶向目标基因并激活基因的表达,但其激活服从较低,需求同时运用两个sgRNA才干完成无效激活。为了进一步进步激活服从,任兴杰博士经过Gal4/UAS零碎表达dCas9转录激活复合体,同时奇妙天时用T2A自剪切多肽介导dCas9-VP64和MCP-p65-HSF1两个转录激活扣构域的表达,构建了flySAM零碎。后果表现,该零碎只需求一个sgRNA就可以特异高效地激活目标基因(图1),并发生相应表型(图2),并且应用该零碎,可以方便地停止嵌合体剖析。别的,该零碎初次完成同时加强多个目标基因的表达,这为研讨卵白质复合物以及功用冗余基因的功用,提供了一套强无力的妙技。现在,以flySAM零碎为根底的基因组范畴的转基因转录激活资源库正在构建中,这一转录激活零碎和其相干转基因品系将在果蝇研讨范畴失掉普遍运用,并推进相干研讨的疾速开展。


flySAM零碎转录激活表示图


应用flySAM零碎在党羽中激活目标基因的表达


清华大学医学院倪建泉传授、孙锦博士(现为清华大学医学院倪建泉课题组博士后)以及哈佛医学院Norbert Perrimon传授为本文配合通讯作者。生命迷信结合中央博士生贾豫,清华大学医学院博士生徐荣刚等为本文配合第一作者。本研讨取得国度天然迷信基金和国度科技支持方案等赞助。



◎原文链接:

http://www.pnas.org/content/early/2018/04/13/1800677115



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